抑胶素对大鼠Ｃ6胶质瘤细胞血管内皮生长因子的抑制作用

目的：探讨抑胶素对大鼠Ｃ6胶质瘤细胞血管内皮生长因子（VEGF）的抑制作用。方法： 采用单层贴壁培养法对大鼠Ｃ6脑胶质瘤细胞株进行培养,并用2、4、8和16 ng•L^-1抑胶素作用７２ ｈ，免疫组化法观察抑胶素对Ｃ6胶质瘤细胞VEGF的抑制作用。结果：VEGF表达阳性的细胞绝大部分表现为细胞浆和（或）细胞核染成黄褐色。PBS对照组的C6胶质瘤细胞VEGF在细胞浆中表达明显，经不同浓度的抑胶素处理７２ ｈ后， 肿瘤内VEGF阳性细胞密度较PBS对照组下降（P<0.05，P<0.01），不同浓度的抑胶素作用后C6细胞中VEGF灰度值不同：2 ng•L^-1抑胶素组（182.3±5.7）与PBS对照组（185.6±6.5）比较差异有显著性（P<0.05），4 、8和16 ng•L^-1抑胶素组及顺铂处理组细胞VEGF灰度值（分别为176.8±5.4、169.8±4.1、162.6±2.9和167.3±3.5）与PBS对照组比较差异有显著性（P<0.01）。结论：抑胶素对大鼠Ｃ6胶质瘤细胞VEGF有抑制作用。     

趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达

目的： 构建趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA（siRNA）表达载体，研究其对CXCR4基因表达的沉默效果，探索抗人免疫缺陷病毒-1 （HIV-1）治疗的新途径。方法： 根据软件设计针对CXCR4基因的siRNA序列，经退火成互补双链，克隆到Psilencer^M3.1-H1 neo载体中，经测序鉴定插入序列的正确性。转染MT₄细胞后，采用RT-PCR及流式细胞仪方法检测转染siRNA质粒的实验组、转染空载体的阴性对照组和空白细胞对照组间抑制基因表达情况。结果： PCR及琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒Psilencer^M 3.1-H1- siRNA neo，有正确的特异性片段，DNA测序也证明具有正确序列；该载体转染MT₄细胞48 h后，能明显抑制CXCR4基因表达，其表达抑制率为70%，与空白对照组和阴性组比较差异有显著性（P<0.05）。结论： 成功构建趋化因子受体CXCR4的siRNA表达载体。     

磷酸二酯酶抑制剂对C型钠尿肽作用下家兔心房机械活动的影响

目的：观察磷酸二酯酶抑制剂（PDEI）对C型钠尿肽（CNP）作用下家兔心房机械活动及心房肌细胞内环核苷酸（cAMP,cGMP）浓度的影响。方法：采用大耳白兔麻醉后立即开胸取出心脏置于氧饱和的36.5℃生理盐水中,剥离左心房后立即固定在心房灌流装置上,用CNP及不同浓度PDEI检测心房搏出量和心房搏动压,采用放射免疫法测定cAMP和cGMP浓度。结果：①与对照循环组比较,CNP（30.0 nmol/L）组心房搏出量和心房搏动压明显降低（P<0.01）,cGMP的含量显著增加（P<0.001）,cAMP含量则无显著性变化 （P>0.05）。②与对照循环组比较,磷酸二酯酶(PDE)非选择性抑制剂IBMX组（1 000.0 nmol/L）心房搏出量和心房搏动压显著增加（P<0.001）,cAMP及cGMP的含量显著增加（P<0.001）;与IBMX组比较,IBMX（1 000.0 nmol/L）加CNP（30.0 nmol/L） 组心房搏出量、心房搏动压 、cAMP含量、cGMP含量则无显著性变化（P>0.05）。③与对照循环组比较,PDE2抑制剂EHNA（30.0 nmol/L）组心房搏出量和心房搏动压明显降低（P<0.05）,cAMP含量无显著性变化(P>0.05）;EHNA（30.0 nmol?L-1）加CNP（30.0 nmol?L-1）组心房搏出量和心房搏动压显著降低（P<0.01）,cAMP含量无显著性变化（P>0.05）;与EHNA组比较,EHNA加CNP组心房搏出量和心房搏动压明显降低（P<0.05）,cAMP含量无明显变化（P>0.05）。④与对照循环组比较,PDE3抑制剂milrinone（1.0 nmol/）组心房搏出量和心房搏动压增加,但差异无显著性（P>0.05）;cAMP含量则明显增高（P<0.05）;milrinone（1.0 nmol/L） 加CNP（30.0 nmol/L）组心房搏出量和心房搏动压显著降低（P<0.001）,cAMP含量明显增高（P<0.05）。与milrinone组比较,milrinone 加CNP组心房搏出量、心房搏动压显著降低（P<0.001）,cAMP含量则无明显变化（P>0.05）。结论：CNP抑制家兔心房机械活动,其机制与增加细胞内cGMP含量有关;不同PDEI对CNP抑制心房机械活动产生不同的影响。     

硝苯地平对慢性铁过负荷大鼠铁沉积和营养代谢的影响

目的观察硝苯地平对慢性铁过负荷大鼠肝、肾和脾组织铁沉积与营养代谢的影响,探讨硝苯地平治疗铁过负荷等代谢疾病的可能性。方法雄性SD大鼠连续8周喂饲铁含量为3.5 g.kg-1的高铁饲料,制备慢性铁过负荷动物模型。8周后,模型大鼠ip给予硝苯地平1,3和5 mg.kg-1,连续7 d。组织学染色观察肝、肾和脾组织铁沉积,用试剂盒分别测定血脂、脂质过氧化及抗氧化指标,同时测定血清铁蛋白(SF)和总铁结合力(TIBC);用全自动生化分析仪或荧光分光光度计检测血清中营养元素铁、钙、锌和硒的含量。结果与正常对照组比较,慢性铁过负荷模型组大鼠肝、肾和脾组织中铁沉积明显;与模型组比较,硝苯地平5 mg.kg-1组组织中铁沉积明显降低(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较,模型组血清甘油三酯(TG)含量由1.25±0.21升高到(1.86±0.75)mmol.L-1,总胆固醇(TC)由1.52±0.17升高到(1.91±0.34)mmol.L-1,丙二醛(MDA)由11.2±2.8升高到(15.3±3.6)μmol.L-1,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性由204±52升高到(286±75)kU.L-1(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性无明显变化;与模型组比较,硝苯地平5 mg.kg-1组TC降低到(1.65±0.36)mmol.L-1,LDL由1.14±0.15降低到(0.86±0.16)mmol.L-1,MDA含量降低到(11.9±3.5)μmol.L-1(P<0.05),TG,HDL,SOD和GSH-Px无明显变化;硝苯地平1和3 mg.kg-1对上述指标无明显影响。与正常对照组比较,模型组血清中铁含量由1.21±0.11升高到(1.57±0.25)mg.L-1,SF由232±17升高到(348±46)mg.L-1,锌、硒和钙含量分别由1.8±0.6,0.096±0.018和(120±26)mg.L-1降低到1.4±0.4,0.072±0.012和(77±15)mg.L-1(P<0.05,P<0.01),TIBC无明显变化;与模型组比较,硝苯地平5 mg.kg-1组血清铁含量降低到(1.32±0.14)mg.L-1,硒含量升高到(0.087±0.017)mg.L-1,钙含量升高到(97±16)mg.L-1(P<0.05),对SF,TIBC和锌含量无明显影响;硝苯地平1和3 mg.kg-1对上述指标无明显影响。结论硝苯地平能减少铁沉积,改善慢性铁过负荷大鼠的营养代谢,对铁过负荷等代谢疾病可能具有一定的治疗作用。     

自动电位滴定法和高效液相色谱法测定深颜色果蔬中维生素C浓度的比较

目的：探讨应用自动电位滴定法和高效液相色谱（HPLC）法定量测定深颜色果蔬中维生素C（Vc）浓度的可行性,为少量或批量果蔬样品Vc浓度的测定提供方法依据。方法：选取市售的15种蔬菜和15种水果的可食部分,加入一定量的草酸做Vc保护剂进行匀浆、过滤、离心处理,取一定量的上清液分别对其中的Vc浓度进行自动电位滴定和HPLC分析,对于同一红柿椒样品,分别用2种分析法对样品的Vc浓度进行准确度和精确度的测定。结果：2种分析法检测30种果蔬中Vc的浓度差异无统计学意义（P>0.05）,电位法对红柿椒中Vc浓度测定的回收率为98.34%～103.98%,HPLC法对Vc浓度测定的回收率为99.66%～101.49%;电位法测定红柿椒中Vc的相对标准偏差（RSD）为1.77%～2.88%,HPLC法测定Vc的RSD为0.15%～0.32%,且HPLC法线性关系良好(R2=0.999　9)。结论：2种分析法对深颜色果蔬样品中Vc浓度测定的准确度和精密度均能满足定量分析的要求,均为较理想的测试方法。     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的：观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法：采用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞（siRNA-eIF4E组）,同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果：与空白对照组及空质粒组比较, siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调（P<0.01）,Hep-2细胞生存率下降（P<0.05）,细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）,细胞凋亡率增加（P<0.05）,凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调（P<0.05）。结论：siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

糙皮侧耳碱提水溶性多糖对肿瘤的抑制作用及其机制

目的：研究糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)碱提水溶性多糖对肿瘤的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：通过碱液提取、乙醇沉淀、联合脱蛋白和柱层析方法,分离得到粗皮侧耳碱提水溶性多糖WPOP-N1;BalB/C小鼠前肢腋皮下注射S-180肉瘤细胞建立肿瘤小鼠模型,将60只雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、环磷酰胺阳性对照组（30 mg/kg）、WPOP-N1 低、中和高剂量组（100、200和400 mg/kg）,每组10 只。除正常对照组外,在每只小鼠的前肢腋皮下注射S-180肉瘤细胞悬液,对照组小鼠给予生理盐水,模型对照组小鼠给予脂多糖10 mg?L-1。采用ELISA法检测各组小鼠血清TNF-α水平,评价WPOP-N1对巨噬细胞吞噬作用,NO和TNF-α水平的影响。结果： WPOP-N1低、中和高剂量组小鼠瘤质量分别为（2.38±0.55）、（1.79±0.64）和（1.37±0.51）g,均低于正常对照组［（3.71±0.81）g］（P<0.05）;WPOP-N1低、中和高剂量组抑瘤率分别为35.8%、51.8%和63.1％;WPOP-N1中、高剂量组荷瘤小鼠血清TNF-α水平高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）;腹腔巨噬细胞的吞噬能力高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）;WPOP-N1低、中和高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α水平升高（P<0.05）,并具有剂量效应。结论： WPOP-N1具有显著的体内肿瘤抑制作用,其作用机制可能是活化巨噬细胞分泌NO和TNF-α,并增强巨噬细胞的吞噬能力。     

银杏叶提取物对STZ和ISO协同诱发大鼠糖尿病心肌病的治疗作用

目的: 探讨银杏叶提取物(GBE) 对链脲佐菌素（STZ）和盐酸异丙肾上腺素(ISO)协同诱发大鼠糖尿病心肌病(DCM)的治疗作用。方法： 20只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组和治疗组,每组5只。正常对照组大鼠不予处理,其他3组大鼠给予STZ和ISO造模,模型组大鼠给予生理盐水灌胃,阳性对照组和治疗组大鼠造膜后分别灌胃给予盐酸贝那普利和GBE,观察各组大鼠体质量、血糖水平、血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达水平和心肌组织形态学的变化。结果：给药1和2周时,模型组大鼠体质量、血糖水平较正常对照组降低(P<0.05）,阳性对照组和治疗组大鼠体质量、血糖水平大鼠较模型组降低(P<0.05）。模型组大鼠AST、LDH和 TGF-β1水平较正常对照组降低（P<0.05）,阳性对照组和治疗组大鼠AST、LDH和 TGF-β1水平较模型组升高（P<0.05）。正常对照组大鼠心肌无细胞肿胀;模型组大鼠心肌细胞出现界限清晰、多发散在坏死灶,坏死灶内有旺盛的成纤维细胞增生,并可见一定量的胶原纤维;治疗组大鼠心肌细胞坏死病灶面积减小,纤维化程度减轻。结论：GBE可以缓解STZ和ISO协同诱导的大鼠心肌损害。     

颈椎稳定性异常老龄小鼠脑海马神经细胞中Bcl-2和Bax的表达

目的：探讨颈椎失稳老龄小鼠脑海马神经细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,阐明颈椎失稳所致老龄小鼠记忆和学习能力下降的机制。方法：选取ICR小鼠20只,随机分为模型组和对照组,每组10只,分组后模型组采用颈椎乳酸堆积法制备小鼠颈椎稳定性异常病理模型,对照组未经任何处理。水迷宫实验检测小鼠学习和记忆能力;HE染色观察脑海马神经细胞形态学变化;TUNEL染色观察脑海马神经细胞凋亡情况;RT-PCR和免疫组织化学法检测小鼠脑海马组织Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,模型组小鼠水迷宫实验游全程时间和错误次数显著增加(P<0.01);HE染色,与对照组比较,模型组小鼠脑海马神经细胞排列稀疏,死亡细胞明显增多;TUNEL染色,与对照组（7.52%±0.99%）比较,模型组脑海马凋亡细胞数（29.63%±1.63%）明显增多（P<0.01）;RT-PCR和免疫组织化学染色,模型组小鼠脑海马神经细胞Bcl-2表达明显减弱,Bax表达明显增强。结论：颈椎稳定性异常导致的小鼠脑海马神经细胞Bcl-2表达下调,Bax表达上调,可能是促进其细胞凋亡的主要机制之一。     

DELFIA检测血清PSA、fPSA及fPSA/PSA在前列腺疾病诊断中的应用

目的：探讨双标记时间分辨荧光免疫分析(DELFIA)检测血清PSA、fPSA及fPSA/PSA在前列腺疾病诊断中的应用。方法：应用DELFIA法检测正常对照组(34例)、前列腺炎组(46例)、前列腺增生症组(123例)及前列腺癌组(39例)血清PSA、fPSA含量及fPSA/PSA。结果：前列腺癌组PSA、fPSA与其他三组比较差异均有显著性(P＜0.01),而其他3组之间比较差异显著性(P＞0.05);前列腺癌组fPSA/PSA明显降低,与其他3组比较差异均有显著性(P＜0.05)。结论：应用DELFIA检测PSA、fPSA含量及fPSA/PSA是提高前列腺疾病诊断与鉴别诊断更为有效的方法,尤其对前列腺癌诊断更有意义。